Der früh verwaiste Peter Parker wohnt im New Yorker Stadtteil Queens bei seiner geliebten Tante May und seinem Onkel Ben. Peter führt das Leben eines normalen Schülers der, protegiert vom Zeitungs-Herausgeber J. Jonah Jameson, beim Daily Bugle als Fotograf jobbt, sich nach der wunderschönen Mary Jane Watson verzehrt und sich mit seinem Freund Harry Osborn herumtreibt.

Auf einer Studienfahrt, bei der Peter und seine Mitschüler an einer wissenschaftlichen Veranstaltung über Spinnen teilnehmen, wird Peter von einer genetisch veränderten Spinne gebissen. Kurz darauf entdeckt er an sich ungewöhnliche Kräfte: Er verfügt plötzlich über die Kraft und Beweglichkeit einer Spinne sowie über einen ausgeprägten ESP-artigen "Spinnensinn."